Préparation standard :
Préparez une norme courante mélangée en pesant exactement (magnésium ±0.01) mg environ 10 de chaque norme de kavalactone dans un ballon 10-mL jaugé. Ajoutez 7,0 ml de méthanol et les soniquez jusqu'à dissoudre. Diluez au volume avec du méthanol et mélangez.
Avis : Alternativement, préparez une norme d'actions de kavain de façon semblable et employez les facteurs de réponse de kavalactone pour mesurer contre.
Diluez la norme d'actions pour créer un minimum une courbe standard quatre point. Les dilutions standard suggérées des actions sont 1h10, 1h25, et 1:100 utilisant le méthanol.
Avis : Stockez les normes aux températures réfrigérées (0 - 5°C). Kavalactones dégradent rapidement après 48 heures. La préparation des normes fraîches avant chaque analyse est recommandée.
Appareil
· Équilibre analytique calibré précis au magnésium ±0.01
· Flacon, volumétrique, classe A, tailles assorties
· Fioles, chromatographie avec le chapeau
· Système de chromatographie liquide de haute performance comme décrit en chapitre d'USP. Vérifiez et documentez cet appareil, logiciel, et les sous-systèmes répondent à des exigences de marche pour la qualification d'installation/qualification d'opération (IQ/OQ).
· Filtrez, 0,45 µm, le nylon de Gelman Acrodisc (P/N 4426), polypropylène de Whatman Puradisc™ (chat. No. 6788-2504), verre de Whatman GD/X (chat. No. 6894-2504) ou Sonicator équivalent
· Colonne, YMCbasic, 5 µm, 4,6 x 250 millimètres (chat. Non BA99S05-2546WT). Colonne équivalente, YMC Je Sphere H80, 4µ, 4,6 x 250 (chat. Non JH08S04-2546WT).
Réactifs
· L'eau, catégorie de CLHP ou Nanopure
· Méthanol, catégorie de CLHP
· Acétonitrile, catégorie de CLHP
· Acide phosphorique, catégorie de réactif d'ACS
Préparation témoin :
Matière végétale
Pesez exactement (± 0.1mg) mg environ 750 de tige, d'épluchage, ou de matériel finement moulu de racine.
Placez le matériel dans un ballon 50-mL jaugé avec 40 ml de méthanol/d'eau (70/30). Soniquez pendant 60 minutes à la température ambiante.
Permettez au flacon de se refroidir à la température ambiante et de diluer au volume avec de l'eau le méthanol/(70/30) et de se mélanger.
Échantillon de filtre et d'endroit dans une fiole et un chapeau de CLHP.
Poudre et extrait mol (pâte)
Pesez exactement (mg de ± 0,1) mg environ 100 d'extrait dans un ballon 50-mL jaugé. (Les 100 poids de mg sont basés sur un contenu du kavalactone 50-60% dans l'extrait.) Avis : Homogénéisez soigneusement l'extrait avant l'échantillonnage. Ceci est accompli en plaçant l'extrait dans un conteneur immergé dans un 60° - bain d'eau chaud de 80° C jusqu'à ce que coulant librement.
Ajoutez 40 ml de méthanol et les soniquez pendant 10 minutes ou jusqu'à tous les solides se sont dissous.
Permettez au flacon de se refroidir à la température ambiante et de diluer au volume avec du méthanol et de se mélanger.
Échantillon de filtre et d'endroit dans une fiole et un chapeau de CLHP.
Échantillons de poudre
L'extrait de Kava est souvent mélangé ou séché au vaporisateur sur de divers transporteurs. Pour analyser avec succès des échantillons de poudre, il est nécessaire de développer une étape de préparation témoin qui récupère les kavalactones du transporteur. Ceci peut être accompli en extrayant d'abord avec de l'eau le méthanol ou pur.
Conditions chromatographiques :
Colonne : YMCbasic, 5 µm, 4,6 x 250 millimètres
La température de colonne : 40°C
Débit : 0,6 mL/min pour YMCbasic ; 1,0 mL/min pour Je Sphere
Phase mobile : 0,1% acides phosphoriques isocratic : alcool isopropylique : acétonitrile (64 : 16h20 v/v)
Détection : 220 nanomètre (246 nanomètre alternativement pour améliorer la sélectivité)
Volume d'injection : µL 5
Temps d'exécution : 30 minutes
Procédure :
Préparez les solutions étalons de norme et prélevez les préparations comme dirigées.
Faites une injection simple d'un blanc de dissolvant d'extraction.
Faites l'injection simple des préparations standard.
Créez un complot de linéarités des zones de crête standard contre des concentrations standard.
Faites les injections simples des préparations témoin.
Calculez la concentration de kavalactone dans l'échantillon.
Aptitude de système :
Le coefficient de corrélation du linéaire doit être ≥0.999. La résolution entre le desmethoxyyangonin et les crêtes de yangonin doit être ≥1.8.
Biotechnologie Cie., Ltd de Y-herbe de Shaanxi.